САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
РАСТИТЕЛЬНЫХ
ПОЛИМЕРОВ
ОТЧЕТ ПО ИНЖЕНЕРНОЙ ПРАКТИКЕ
Биоактивные производные хитозана
ПРОВЕРИЛ: С.Н.С., K.Х.H.
ЛЮДМИЛА АЛЕКСАНДРОВНА НУДЬГА
Институт высокомолекулярных соединений
Российской академии наук
ВЫПОЛНИЛ: СТ. ГР. 156
ЕКИМОВ АЛЕКСАНДР ВЛАДИМИРОВИЧ
САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 2004
1 Вступление
1.1 Хитозан – природный полимер XXI века
Уникальные свойства хитина и хитозана привлекают внимание большого числа специалистов самых разных специальностей. Роль полимеров в нашей жизни является общепризнанной, и все области их применения в быту, промышленном производстве, науке, медицине, культуре трудно даже просто перечислить. Если до XX века человеком использовались полимеры природного происхождения – крахмал, целлюлоза (дерево, хлопок, лен), природные полиамиды (шелк), природные полимерные смолы на основе изопрена – каучук, гуттаперча, то развитие химии органического синтеза в XX веке привело к появлению в различных областях деятельности человека огромного разнообразия полимеров синтетического происхождения – пластмасс, синтетических волокон и т.п. Происшедший технологический прорыв не только кардинально изменил нашу жизнь, но и породил массу проблем, связанных с охраной здоровья человека и защитой окружающей среды.
Поэтому закономерным является большой интерес науки и промышленности к
поиску и использованию полимеров природного происхождения, таких как хитин
и хитозан. Эти полимеры обладают рядом интереснейших свойств, высокой
биологической активностью и совместимостью с тканями человека, животных и
растений, не загрязняют окружающую среду, поскольку полностью разрушаются
ферментами микроорганизмов, могут широко применяться в проведении
природоохранных мероприятий.
В настоящее время известно более 70 направлений использования хитина и
хитозана в различных отраслях промышленности, наиболее важными из которых
во всем мире признаны:
медицина – в качестве средства борьбы с ожирением, связывания и выведения
из организма холестерина, профилактики и лечения сердечно-сосудистых
заболеваний, производства хирургических нитей, искусственной кожи,
лекарственных форм антисклеротического, антикоагулянтного и антиартрозного
действия, диагностики и лечения злокачественных опухолей и язвы желудка;
пищевая промышленность – в качестве загустителя и структурообразователя для
продуктов диетического питания.
1.2 История создания и применения хитозана
Полимеры этой группы заинтересовали ученых-химиков почти 200 лет
назад. Хитин был открыт в 1811 году (H. Braconnot, A. Odier), а хитозан в
1859 году (С. Rouget), хотя свое нынешнее название получил в 1894 году (F.
Hoppe-Seyler). В первой половине XX века к хитину и его производным был
проявлен заслуженный интерес, в частности, к нему имели отношение три
Нобелевских лауреата: Е. Fischer (1903) cинтезировал глюкозамин, P. Karrer
(1929) провел деградацию хитина с помощью хитиназ и, наконец, W.N. Haworth
(1939) установил абсолютную конфигурацию глюкозамина.
Биологически активные свойства хитина и его производного – хитозана -
начали изучаться в 1940-50 годах. В Советском Союзе эти исследования
проводились учреждениями Министерства обороны и имели закрытый характер.
Последнее было связано со способностью хитозана эффективно связывать
радиоактивные изотопы и тяжелые металлы, поэтому хитозан исследовался
прежде всего как эффективный радиопротектор и детоксикант, а также
исследовались возможности применения его для дезактивации объектов,
подвергавшихся радиоактивному заражению.
Новый всплеск интереса к производным хитина и, в частности, хитозану
произошел в 70-е годы, когда результаты исследований этих соединений начали
появляться в открытой печати. Проведенные во всем мире исследования
показали уникальные сорбционные свойства хитозана. Обнаружилось отсутствие
выраженной субстратной специфичности этого вещества, что означает примерно
одинаковую способность связывать как гидрофильные, так и гидрофобные
соединения. Кроме того, у хитозана были обнаружены ионообменные,
хелатообразующие и комплексообразующие свойства. В дальнейших исследованиях
была показана антибактериальная, антивирусная и иммуностимулирующая
активность. Комплексные формы хитозана также проявляют высокие
антиоксидантные свойства, что нашло свое применение в лечении заболеваний
желудочно-кишечного тракта, в лечении механической и ожоговой травмы.
О большом интересе к проблемам изучения этих биополимеров, технологии их
получения и использования свидетельствуют восемь международных конференций
по хитину и хитозану, проведенных за последние 27 лет: США (1977), Япония
(1982), Италия (1985), Норвегия (1988), США (1991), Польша (1994), Франция
(1997)
В России за прошедшие годы хитину и хитозану были посвящены семь конференций: Владивосток (1983), Мурманск (1987), Москва (1991, 1995, 1999 и 2001), Санкт-Петербург 2003, из которых две последних имели статус международных. Весной 2000 года было создано Российское Хитиновое Общество, объединившее более 50 региональных отделений.
Все это говорит о нарастающем интересе к хитину и хитозану не только химиков, но и специалистов самого разного профиля – медиков, биологов, микробиологов и биотехнологов.
1.3 Химическое строение и свойства хитина и хитозана
Хитин является главным компонентом панцирей ракообразных и насекомых.
По химической структуре он относится к полисахаридам, мономером хитина
является N-ацетил-1,4-?-D-глюкопиранозамин (рис. 1).
Рис. 1 Химическая структура хитина.
При деацетилировании хитина получается хитозан. По химической
структуре хитозан является сополимером D-глюкозамина и N-ацетил-D-
глюкозамина. В зависимости от эффективности реакции деацетилирования
получаются хитозаны с различной степенью деацетилирования . Степень
деацетилирования показывает процентное содержание D-глюкозамина в молекуле
хитозана, т.е. если речь идет о хитозане со степенью деацетилирования 85%,
то это означает, что в молекуле хитозана в среднем содержится 85% D-
глюкозаминовых остатков и 15% N-ацетил-D-глюкозаминовых остатков.
Рис.2 Химическая структура хитозана.
Химические свойства хитозана связаны с его химической структурой.
Большое количество свободных аминогрупп в молекуле хитозана определяет его
свойство связывать ионы водорода и приобретать избыточный положительный
заряд, поэтому хитозан является прекрасным катионитом. Кроме того,
свободные аминогруппы определяют хелатообразующие и комплексообразующие
свойства хитозана. Химическая структура хитозана показана на рис.2.
Сказанное объясняет способность хитозана связывать и прочно удерживать ионы
металлов (в частности радиоактивных изотопов и токсичных элементов) за счет
разнообразных химических и электростатических взаимодействий.
Большое количество водородных связей, которые способен образовать хитозан,
определяют его способность связывать большое количество органических
водорастворимых веществ, в том числе бактериальные токсины и токсины,
образующиеся в толстом кишечнике в процессе пищеварения.
С другой стороны, обилие водородных связей между молекулами хитозана
приводит к его плохой растворимости в воде, поскольку связи между
молекулами хитозана более прочные, чем между молекулами хитозана и
молекулами воды. Вместе с тем, хитозан набухает и растворяется в
органических кислотах – уксусной, лимонной, щавелевой, янтарной, причем при
набухании он способен прочно удерживать в своей структуре растворитель, а
также растворенные и взвешенные в нем вещества Хитозан также способен
связывать предельные углеводороды, жиры и жирорастворимые соединения за
счет гидрофобных взаимодействий и сетчатой структуры, что сближает его по
сорбционным механизмам с циклодекстринами.
Расщепление хитина и хитозана до N-ацетил-D-глюкозамина и D-глюкозамина
происходит под действием микробных ферментов – хитиназ и хитобиаз, поэтому
они полностью биологически разрушаемы и не загрязняют окружающую среду.
Таким образом, хитозан является универсальным сорбентом, способным
связывать огромный спектр веществ органической и неорганической природы,
что определяет широчайшие возможности его применения в жизни человека.
Несмотря на огромную литературу о связи сорбционных свойств хитозана с его химической структурой, нельзя сказать, что исследования в области химии хитина/хитозана близки к завершению. Постоянно открываемые новые свойства этого вещества, в частности, обнаруженная биологическая активность еще не получила должного объяснения с точки зрения химической структуры. Имеющиеся данные, что характер биологической активности хитозана зависит от его молекулярного веса и степени деацетилирования, нуждаются в дальнейшей проверке и изучении. Этот обзор является тем более актуальным, что выяснение связи химического строения и биологической активности позволит создавать вещества, сохраняющие известные свойства хитозана и обладающие новыми полезными качествами.
2. Биоактивные производные хитозана
2.1 Противобактериальное действие четвертичных аммониевых солей хитозана
Производные соединения хитозана, такие как N,N,N-триметил хитозан, N-
N-пропил-N,N-диметил хитозан и N-фурфурил-N,N-диметил хитозан были получены
при использовании в качестве исходного продукта хитозана со степенью
деацетилирования 96% и следующими молекулярными массами - 2,14·105;
1,9·104; 7,8·103 . Аминогруппы хитозана реагируют с альдегидами, образуя
промежуточное соединение - основание Шиффа. Четвертичные соли хитозана
были получены при реакции основания Шиффа с йодистым метилом. На степень
превращения в четвертичное соединение и водорастворимость получившегося
производного влияла молекулярная масса исходного образца хитозана. [1]
Хотя хитина в природе много, он имеет ограниченное применение из-за его недостаточной растворимости и реакционной способности. Хитозан растворим уксусной кислоте и других органических растворителях. [2] Хитозан обладает некоторым бактерицидным и фунгицидным действием. Однако хитозан показывает свою биологическую активность только в кислой среде, так как он плохо растворяется при pH выше 6,5. Таким образом, водорастворимые производные хитозана, которые растворяются в кислоте, могут иметь хорошие шансы быть внедренными в медицинскую практику как антибактериальные средства.
Четвертичные аммониевые соли хитозана были исследованы на предмет увеличения растворимости. Опубликована информация о синтезе N- диметилхитозана и получении N-триметилхитозана йодида с формальдегидом и боргидридом натрия. Триметилхитозан йодид аммония был также получен реакцией низкоацетилированного хитозана с йодистым метилом и гидроксидом натрия при контролируемых условиях. N-алкил хитозан был приготовлен введением алкильной группы в аминные группы хитозана (Mv 7,25·105) через основание Шиффа. Для получения четвертичной аммониевой соли хитозана, которая растворяется в воде, была проведена реакция производных N-алкил хитозана с йодистым метилом (рис. 3). Антибактериальное действие данного производного хитозана усиливалось с увеличением длины цепи алкильного заместителя.
Рис.3 Синтез N-триметилхитозана йодида
Было исследовано влияние молекулярной массы на антибактериальную и фунгицидную активность. При выявлении противобактериального действия четвертичного производного хитозана против Escherichia coli определяли минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) и минимальную бактерицидную концентрацию (МБК) в воде, 0,25% и 0,5% среде уксусной кислоты. Результаты показывают, что антибактериальная активность против Escherichia coli связана с молекулярной массой. Антибактериальная активность четвертичных аммониевых солей хитозана в среде уксусной кислоты более выражена, чем в воде. Их противобактериальное действие тем более выраженное, чем выше концентрация уксусной кислоты. Так же было найдено – бактерицидное действие производного сильнее, чем хитозана. [1]
Хитозан с молекулярной массой в пределах от10000 до 100000 может быть полезен для ограничения роста бактерий. Хитозан кальмара с молекулярной массой 220000 проявляет наибольшую противобактериальную активность. Хитозан со средней молекулярной массой 9300 эффективен для ограничения роста Escherichia coli, в то время как хитозан с молекулярной массой 2200 ускорял рост численности бактерий. [1]
В отечественной литературе есть информация о синтезе четвертичных
аммониевых соединений хитозана с применением органических оснований, и
исследования, посвященные свойствам полученных соединений Для синтеза
применялись перегнанные сухие метил- и этилиодид. Иодистоводородную
кислоту, образующуюся во время реакции, связывали органическими
основаниями: пиридином, 2,4-лутидином, 2,4,6-коллидином и триэтиламином.
Полученное соединение выделяли из реакционной смеси фильтрованием, отмывали
метанолом, сушили.
Было установлено, что рКа хитозана 6.30. Был сделан вывод, что
повышение степени N-алкилирования будет наблюдаться при использовании
оснований с рКа > 6.30. Опыты показали, что наиболее глубоко реакция идет в
присутствии триэтиламина, рКа которого гораздо выше, чем у хитозана.
Установлено, что N-триметил- и N-триэтилхитозаны являются полиэлектролитами
и их основность увеличивается с ростом степени замещения. [4]
2.2 Лечение ран с применением N-карбоксибутил хитозана
У больных, перенесших восстановительную хирургию, донорские участки
лечились мягкими прокладками N-карбоксибутилхитозана. При сравнении с
контрольными донорскими участками была обнаружена лучшая васкуляризация и
отсутствие воспалительных клеток на кожном уровне. Применение N-
карбоксибутилхитозана приводило к формированию регулярно организованной
кожной ткани и уменьшало аномальное заживление. [2]
Одно из преимуществ N-карбоксибутил хитозана при заживлении ран - обеспечение гелеподобного слоя при контакте с раневыми жидкостями. Данный слой обеспечивает превосходную защиту недавно сформированных тканей от механических повреждений. Внешняя поверхность прокладки принимала вид корки и обеспечивала защиту против вторичных инфекций ввиду бактерицидности полимера. В течение периода заживления форма раны сохранялась, хотя её размер уменьшался быстро и без осложнений, в противоположность контрольным группам. В контрольных группах форма раны была вскоре потеряна после традиционного лечения. [2]
В ранних стадиях восстановления ткани N-карбоксибутил хитозан
способствует формированию свободной соединительной ткани, а не больших и
плотных волоконных связок, облегчая тем самым диффузию. Соединительная
ткань регулярно и надлежащим образом структурирована, без значительных
рубцов и обладает хорошей функциональностью т.е. прочностью при растяжении.
При образовании эпителия трехмерная решетка является очень важной
составляющей. N-карбоксибутил обеспечивает такую решетку и возможно
модулирует образование эпителия.
Таким образом N-карбоксибутил хитозан может классифицироваться как новый тип биологически активных перевязочных средств.
3. Библиография
1. Zhichen Jia, Dondfeng shen, Weiliang Xu// Synthesis and antibacterial activities of quaternary ammonium salt of chitosan// Carbohydrate research 2001, p. 1-6.
2. Graziella Biagini, Aldo Bertani e.t.c.// Wound managment with N- carboxybutil chitosan// Biomaterials 1991, Vol. 12, April, p. 281-285.
3. Hioshi Sashiwa, Norioki Kawasaki e.t.c.// Chemical modifications of chitosan. Part 15 // Carbohydrate research 2003.
4. Л. А. Нудьга, Е. А. Плиско, С. Н. Данилов // N-алкилирование хитозана// Журнал общей химии 1973, том XLIII, с. 2756-2760.
5. Internet
Содержание
1 Вступление 2
1.1 Хитозан – природный полимер XXI века 2
1.2 История создания и применения хитозана 3
1.3 Химическое строение и свойства хитина и хитозана 4
2. Биоактивные производные хитозана 7
2.1 Противобактериальное действие четвертичных аммониевых солей хитозана
7
2.2 Лечение ран с применением N-карбоксибутил хитозана 10
3. Библиография 11